魚ELISA試劑盒應用雙抗(kang)體(ti)夾(jia)心法測(ce)定(ding)標(biao)(biao)本中魚皮(pi)質(zhi)醇(chun)水平(ping)。用純(chun)化的(de)(de)魚皮(pi)質(zhi)醇(chun)抗(kang)體(ti)包(bao)被(bei)微孔(kong)板，制(zhi)成(cheng)固相抗(kang)體(ti)，往包(bao)被(bei)單(dan)抗(kang)的(de)(de)微孔(kong)中依(yi)次加(jia)入皮(pi)質(zhi)醇(chun)，再與HRP標(biao)(biao)記(ji)的(de)(de)皮(pi)質(zhi)醇(chun)抗(kang)體(ti)結合(he)，形成(cheng)抗(kang)體(ti)-抗(kang)原-酶標(biao)(biao)抗(kang)體(ti)復合(he)物(wu)，經過*洗(xi)滌后加(jia)底物(wu)TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶的(de)(de)催(cui)化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，并在(zai)酸(suan)的(de)(de)作用下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)zui終的(de)(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)(de)深淺和樣(yang)品(pin)中的(de)(de)皮(pi)質(zhi)醇(chun)呈正相關。用酶標(biao)(biao)儀在(zai)450nm波長下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光度（OD值），通過標(biao)(biao)準(zhun)曲線計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)中魚皮(pi)質(zhi)醇(chun)濃(nong)度。 魚ELISA試(shi)劑盒(he)實(shi)驗規(gui)則介紹(shao)：
1、要保證移(yi)液槍的準(zhun)確性，誤差(cha)不能超過(guo)2%。可用水和電(dian)子(zi)天平(ping)進(jin)(jin)行確定(ding)。但有專(zhuan)業人員進(jin)(jin)行矯正(zheng)。
2、要配備(bei)20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍(qiang)(qiang)各(ge)一支。吸取不同的(de)液體后(hou)，要更換槍(qiang)(qiang)頭。即使是吸取標準品時(shi)。
3、要在實(shi)驗前1小時將試劑盒從(cong)冰箱中取(qu)出，使(shi)各種試劑都恢復到室溫，以使(shi)結果更穩定(ding)。
4、實驗時，要(yao)使底物(wu)避光保存。
5、用槍吸取(qu)液體時(shi)速(su)度不能太快(kuai)，以免產生氣泡而使吸取(qu)量不準確。
6、吸取液(ye)體時，要用量程(cheng)和需要量接近的槍去吸，減(jian)少誤差。
7、將液(ye)(ye)體加(jia)到(dao)酶標(biao)孔中時，避免槍頭(tou)(tou)和孔內液(ye)(ye)體接觸，可(ke)使(shi)槍頭(tou)(tou)上的液(ye)(ye)滴和孔壁接觸，液(ye)(ye)滴會自然(ran)流下去(qu)。
8、液(ye)體全部(bu)加完后(hou)，可將(jiang)酶(mei)標板在桌子上(shang)平行輕輕晃動30秒，混勻液(ye)體。也(ye)可以用(yong)酶(mei)標儀的晃動功能。
9、溫浴時，要(yao)用不(bu)干(gan)膠(jiao)或膠(jiao)帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發。
10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加*。沒有洗板機時，倒去液體后，要將酶標板在報紙或毛紙上用力拍干。
