昆蟲ELISA試劑盒使用流程： 1.標準品的稀(xi)釋(shi)：本試(shi)劑盒提供原(yuan)倍標準品一(yi)支，用(yong)戶可按照下(xia)列方(fang)式在小試(shi)管中(zhong)進行稀(xi)釋(shi)。
400ng/L5號標準(zhun)品150μl的原倍標準(zhun)品加入(ru)150μl標準(zhun)品稀釋液
200ng/L4號標準(zhun)品(pin)150μl的5號標準(zhun)品(pin)加入150μl標準(zhun)品(pin)稀(xi)釋液
100ng/L3號標準(zhun)品150μl的4號標準(zhun)品加(jia)入(ru)150μl標準(zhun)品稀釋(shi)液(ye)
50ng/L2號標(biao)準(zhun)品(pin)150μl的3號標(biao)準(zhun)品(pin)加入150μl標(biao)準(zhun)品(pin)稀釋(shi)液
25ng/L1號(hao)標(biao)準品150μl的2號(hao)標(biao)準品加入150μl標(biao)準品稀釋液
2.加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)：分別設空(kong)白孔(kong)（空(kong)白對照孔(kong)不(bu)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)及酶(mei)標(biao)(biao)試劑，其余各步操作(zuo)相同）、標(biao)(biao)準孔(kong)、待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)。在酶(mei)標(biao)(biao)包被板上標(biao)(biao)準品(pin)(pin)準確加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)50μl，待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)孔(kong)中先(xian)加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)稀釋液40μl，然(ran)后再加(jia)(jia)(jia)待測樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)10μl（樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)zui終稀釋度為(wei)5倍）。加(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)將樣(yang)(yang)(yang)品(pin)(pin)加(jia)(jia)(jia)于(yu)酶(mei)標(biao)(biao)板孔(kong)底部(bu)，盡量不(bu)觸及孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混(hun)勻。
3.溫育：用封(feng)(feng)板膜(mo)封(feng)(feng)板后置37℃溫育30分(fen)鐘。
4.配液：將(jiang)30倍濃縮洗滌液用(yong)(yong)蒸餾水30倍稀(xi)釋后(hou)備(bei)用(yong)(yong)
5.洗(xi)滌(di)：小心(xin)揭掉(diao)封板膜，棄去(qu)液體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌(di)液，靜置30秒(miao)后棄去(qu)，如(ru)此重(zhong)復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫(wen)(wen)育：用封板(ban)膜封板(ban)后置37℃溫(wen)(wen)育30分(fen)鐘。
8.洗(xi)滌：揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗(xi)滌液，靜置30秒(miao)后(hou)棄去，如此重復5次，拍(pai)干。
9.顯色：每孔先(xian)加入顯色劑(ji)A50μl，再加入顯色劑(ji)B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻，37℃避光顯色10分鐘.
10.終止：每孔加(jia)終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測(ce)定：以空白(bai)空調零，450nm波(bo)長依序測(ce)量各孔的吸(xi)光度（OD值）。測(ce)定應在加(jia)終止(zhi)液后15分(fen)鐘(zhong)以內進行。
12.計算：以標(biao)(biao)(biao)準(zhun)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)濃度(du)為橫坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)(biao)，OD值為縱坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)(biao)，在坐(zuo)(zuo)標(biao)(biao)(biao)紙上繪出(chu)(chu)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲線(xian)，根據樣品的(de)(de)(de)OD值由標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲線(xian)查出(chu)(chu)相應的(de)(de)(de)濃度(du)；再(zai)乘以稀釋(shi)倍數；或用標(biao)(biao)(biao)準(zhun)物(wu)(wu)的(de)(de)(de)濃度(du)與OD值計算出(chu)(chu)標(biao)(biao)(biao)準(zhun)曲線(xian)的(de)(de)(de)直線(xian)回歸方程式(shi)，將樣品的(de)(de)(de)OD值代入方程式(shi)，計算出(chu)(chu)樣品濃度(du)，再(zai)乘以稀釋(shi)倍數，即為樣品的(de)(de)(de)實際濃度(du)。
