大鼠磷脂酰(xian)肌醇二磷酸（PIP2）elisa試劑盒(he)試驗原(yuan)理(li)：
大(da)鼠磷(lin)脂酰肌醇二磷(lin)酸（PIP2）elisa試(shi)劑盒是(shi)固相夾心法酶聯免疫吸(xi)附(fu)實驗（ELISA）.已知待(dai)測物質(zhi)(zhi)濃(nong)度(du)的(de)標(biao)準(zhun)品、未(wei)知濃(nong)度(du)的(de)樣品加入(ru)微孔酶標(biao)板內(nei)進行檢測。先將待(dai)測物質(zhi)(zhi)和(he)生物素標(biao)記的(de)抗(kang)體同時溫(wen)育。洗滌(di)后，加入(ru)親和(he)素標(biao)記過(guo)的(de)HRP。再經過(guo)溫(wen)育和(he)洗滌(di)，去除未(wei)結(jie)合(he)的(de)酶結(jie)合(he)物，然后加入(ru)底物A、B，和(he)酶結(jie)合(he)物同時作(zuo)用(yong)。產(chan)生顏色(se)。顏色(se)的(de)深淺和(he)樣品中待(dai)測物質(zhi)(zhi)的(de)濃(nong)度(du)呈比例關系(xi)。

【*優勢】

1、產品(pin)種類(lei)齊(qi)全、質量可靠、*、靈敏度高、效果穩定(ding)、易保存、操(cao)作簡便

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操作注意事項
1）試(shi)劑應(ying)按標(biao)簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀(xi)稀(xi)過后的(de)標(biao)準品應(ying)丟棄，不(bu)可保存。
2）實(shi)驗(yan)中(zhong)(zhong)不(bu)用的板條(tiao)應立即放回包(bao)裝(zhuang)袋中(zhong)(zhong)，密封保存，以免(mian)變質。
3）不(bu)用(yong)的其它試(shi)劑應(ying)包裝好或蓋好。不(bu)同批(pi)號的試(shi)劑不(bu)要混(hun)用(yong)。保質前(qian)使用(yong)。
4）使用(yong)一次性(xing)的(de)吸頭以免(mian)交叉(cha)污染，吸取(qu)終止液(ye)(ye)和(he)底物A、B液(ye)(ye)時，避免(mian)使用(yong)帶(dai)金屬部分的(de)加樣器。
5）使用(yong)干凈的(de)塑料容器配置洗滌液。使用(yong)前充分混(hun)勻試(shi)劑盒(he)里的(de)各種成份及樣品。
6）洗滌酶標(biao)板(ban)時應(ying)充分拍干，不要將吸(xi)水(shui)紙直接放入酶標(biao)反應(ying)孔(kong)中吸(xi)水(shui)。
7）底(di)物(wu)A應揮發，避免長(chang)時間打(da)開蓋子。底(di)物(wu)B對光(guang)(guang)敏(min)感，避免長(chang)時間暴露于光(guang)(guang)下(xia)。避免用(yong)手(shou)接觸(chu)，有毒。實驗完(wan)成(cheng)后應立即讀取OD值(zhi)。
8）加入試劑的(de)順序應*，以保證所有反應板孔溫育的(de)時間(jian)一樣。
9）按照說明(ming)書(shu)中標明(ming)的時間、加液的量(liang)及順序進行溫(wen)育操(cao)作。

10)試劑盒是2-8℃冷藏保存(cun)，樣(yang)本是一(yi)個(ge)月內做(zuo)實驗-20度(du)保存(cun)，三個(ge)月以上-80度(du)保存(cun)。

樣品(pin)收(shou)集、處理(li)及(ji)保存方(fang)法
1）血(xue)清(qing)(qing)-----操作過程中避(bi)免任何細胞刺激。使用不含熱原和(he)內毒素(su)的試(shi)管。收集(ji)血(xue)液后，1000×g離(li)心10分鐘將血(xue)清(qing)(qing)和(he)紅細胞迅速小心地分離(li)。
2）血漿-----EDTA、檸檬(meng)酸(suan)鹽、肝素血漿可(ke)用于檢測(ce)。1000×g離心(xin)30分鐘(zhong)去除顆(ke)粒(li)。
3）細胞上清液---1000×g離心(xin)10分鐘去除(chu)顆粒和聚(ju)合物(wu)。
4）組織勻漿-----將組織加入(ru)適量生理鹽水搗碎。1000×g離(li)心(xin)10分鐘，取(qu)上清液
5）保存------如果樣(yang)品不立(li)即使用，應將其(qi)分(fen)成小(xiao)部分(fen)-70 ℃保存，避免(mian)反(fan)復(fu)冷凍(dong)。盡可能(neng)的不要使用溶(rong)血(xue)或(huo)高血(xue)脂血(xue)。如果血(xue)清中(zhong)大(da)量顆粒，檢(jian)測前先離(li)心或(huo)過濾(lv)。不要在37℃或(huo)更高的溫(wen)度加熱解凍(dong)。應在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍(dong)并確(que)保樣(yang)品均勻地充分(fen)解凍(dong)。

操作步驟(zou)
1）使用前，將所有試劑充(chong)分混勻。不要使液體產(chan)(chan)生大量的(de)(de)泡(pao)沫，以(yi)免加樣(yang)時加入大量的(de)(de)氣泡(pao)，產(chan)(chan)生加樣(yang)上(shang)的(de)(de)誤(wu)差。
2）根據待測(ce)樣(yang)品數量加上標準品的(de)數量決定所需的(de)板條數。每個標準品和空白孔(kong)建議做復孔(kong)。每個樣(yang)品根據自己的(de)數量來定，能(neng)使(shi)用(yong)復孔(kong)的(de)盡(jin)量做復孔(kong)。標本用(yong)標本稀釋液1：1稀釋后(hou)加入50ul于(yu)反應孔(kong)內。
3）加入(ru)稀釋好后的(de)標準品(pin)50ul于反應孔(kong)、加入(ru)待測(ce)樣品(pin)50ul于反應孔(kong)內。立即加入(ru)50ul的(de)生物素標記的(de)抗體。蓋(gai)上膜板，輕輕振(zhen)蕩(dang)混勻，37℃溫育(yu)1小時。
4）甩去孔內液(ye)體，每孔加滿(man)洗(xi)滌液(ye)，振蕩30秒(miao)，甩去洗(xi)滌液(ye)，用吸水紙拍干。重復此操作3次。如果用洗(xi)板機(ji)洗(xi)滌，洗(xi)滌次數增加一次。
5）每(mei)孔加入(ru)80ul的親和(he)鏈酶素-HRP，輕(qing)輕(qing)振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
6）甩去孔內液體，每孔加滿洗(xi)(xi)滌液，振蕩30秒(miao)，甩去洗(xi)(xi)滌液，用(yong)吸水紙(zhi)拍干。重(zhong)復此操作(zuo)3次(ci)。如(ru)果用(yong)洗(xi)(xi)板機洗(xi)(xi)滌，洗(xi)(xi)滌次(ci)數增(zeng)加一次(ci)。
7）每孔(kong)加入(ru)底(di)物A、B各50ul，輕(qing)輕(qing)振(zhen)蕩混勻，37℃溫(wen)育10分(fen)鐘。避免光(guang)照。
8）取出酶標(biao)板，迅速加入(ru)50ul終(zhong)止液，加入(ru)終(zhong)止液后應立(li)即測定結果(guo)。
9）在450nm波長處測定各孔的OD值。

ELISA試劑(ji)盒結(jie)果判斷與分析
1、儀(yi)器值：于波(bo)長450nm的(de)酶(mei)標儀(yi)上(shang)讀取各(ge)孔(kong)的(de)OD值
2、以(yi)吸光度(du)OD值為縱(zong)坐(zuo)標(biao)（Y），相(xiang)應(ying)(ying)的(de)待測(ce)物(wu)(wu)質標(biao)準品濃(nong)度(du)為橫坐(zuo)標(biao)（X），做得相(xiang)應(ying)(ying)的(de)曲線，樣品的(de)待測(ce)物(wu)(wu)質含量可(ke)根據其OD值由(you)標(biao)準曲線換算(suan)出相(xiang)應(ying)(ying)的(de)濃(nong)度(du)。

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