一(yi)、大鼠5-羥基(ji)吲哚(duo)乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒詳細介紹(shao)

中文(wen)名稱:大鼠(shu)5-羥(qian)基吲哚乙酸(5-HIAA)ELISA試劑盒

規格(ge): 48T /96T

品牌:臻科生物

種屬(shu):大鼠ELISA試劑盒

檢測波(bo)長(chang):450 nm

所需樣本體(ti)積: 50ul

適(shi)用范圍:僅供科研，不(bu)得用于臨床診斷。

保存及有(you)效期:2-8℃，六個月

檢測樣本(ben)種(zhong)類:用于測定血(xue)清，血(xue)漿(jiang)(jiang)及相關液(ye)(ye)(ye)體等樣本(ben)的含量或(huo)者(zhe)表(biao)達。例(li)如適(shi)合(he)檢測包括血(xue)清、血(xue)漿(jiang)(jiang)、尿液(ye)(ye)(ye)、胸(xiong)腹水、灌洗液(ye)(ye)(ye)、腦脊液(ye)(ye)(ye)、細(xi)胞(bao)培養上清、組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)(jiang)等標本(ben)。

臻科生物供應的(de)種屬有：人(ren)(ren)、大鼠、小(xiao)鼠、豚(tun)鼠、兔子、人(ren)(ren)、豬牛羊(yang)、雞(ji)鴨鵝、植物ELISA試劑盒等

二、實(shi)驗原理(li)

本試劑(ji)盒應(ying)用雙(shuang)抗體夾心(xin)法測定標本中大(da)鼠5-羥基(ji)吲哚乙酸(suan)(5-HIAA)水平。用純(chun)化(hua)的(de)大鼠5-羥基吲哚乙(yi)酸(5-HIAA)抗體(ti)包被(bei)微孔板，制成固(gu)相抗體(ti)，往包被(bei)單抗的微孔中(zhong)依次(ci)加(jia)大(da)鼠5-羥基吲(yin)哚(duo)乙(yi)酸(5-HIAA)，再(zai)與HRP 標記的5-羥基吲哚(duo)乙(yi)酸(5-HIAA)抗(kang)(kang)體(ti)結合(he)，形成抗(kang)(kang)體(ti)-抗(kang)(kang)原-酶(mei)標抗(kang)(kang)體(ti)復(fu)合(he)物(wu)，經(jing)過*洗滌后加底物(wu)TMB 顯色(se)。TMB 在(zai)HRP 酶(mei)的(de)催化下轉(zhuan)化成藍色(se)，并在(zai)酸的(de)作用(yong)下轉(zhuan)化成終(zhong)的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺和樣品(pin)中的(de)5-羥基吲(yin)哚乙酸(5-HIAA)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸(xi)光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中大鼠5-羥基吲哚(duo)乙酸(suan)(5-HIAA)濃度。

三、試劑(ji)盒組成

四、操作(zuo)步驟

1.標準(zhun)品(pin)的稀釋：本試(shi)劑盒(he)提供(gong)原倍標準(zhun)品(pin)一支，用戶可按照下列(lie)圖(tu)表在(zai)小試(shi)管中進行(xing)稀釋。

2.加(jia)樣(yang)：分別(bie)設空白孔(kong)（空白對照孔(kong)不(bu)加(jia)樣(yang)品及(ji)酶(mei)標試劑，其余各步操作相同）、標準(zhun)孔(kong)、待(dai)測樣(yang)品孔(kong)。在(zai)酶(mei)標包被板(ban)上標準(zhun)品準(zhun)確(que)加(jia)樣(yang)50μl，待(dai)測樣(yang)品孔(kong)中(zhong)先加(jia)樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液40μl，然(ran)后再加(jia)待(dai)測樣(yang)品10μl（樣(yang)品終稀(xi)釋(shi)度為5倍）。加(jia)樣(yang)將樣(yang)品加(jia)于(yu)酶(mei)標板(ban)孔(kong)底部，盡量不(bu)觸及(ji)孔(kong)壁，輕(qing)輕(qing)晃動混勻。

3.溫育：用(yong)封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。   

4.配液：將(jiang)30倍濃縮洗(xi)滌液用蒸餾水30倍稀釋后備(bei)用

5.洗(xi)滌：小(xiao)心揭(jie)掉封板(ban)膜(mo)，棄去(qu)液體，甩干，每孔加(jia)滿洗(xi)滌液，靜置30秒(miao)后棄去(qu)，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標(biao)試(shi)劑50μl，空白(bai)孔除(chu)外(wai)。

7.溫(wen)育：操作同3。

8.洗滌：操(cao)作同5。

9.顯(xian)色(se)：每孔先加(jia)入顯(xian)色(se)劑A50μl，再(zai)加(jia)入顯(xian)色(se)劑B50μl，輕輕震蕩混(hun)勻，37℃避光顯(xian)色(se)10分鐘.

10.終(zhong)止(zhi)：每孔加終(zhong)止(zhi)液50μl，終(zhong)止(zhi)反(fan)應(ying)（此時藍色立轉黃色）。

11.測定：以空白孔調零，450nm波長依序(xu)測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加(jia)終止液后15分鐘(zhong)以內進行。

五、試劑盒計(ji)算(suan)

以標(biao)準物的濃(nong)度為橫坐標(biao)，OD 值為縱坐標(biao)，在坐標(biao)紙(zhi)上繪(hui)出標(biao)準曲線，根據(ju)樣品的

OD 值由標準曲線查出(chu)相應的(de)濃度；再乘以稀(xi)釋倍數(shu)；或(huo)用標準物(wu)的(de)濃度與OD 值計算出(chu)標

準曲線的直線回歸方程式，將樣(yang)品的OD 值代入方程式，計算出樣(yang)品濃度，再乘(cheng)以稀(xi)釋倍數(shu)，

即(ji)為樣品的實際濃度。

六、注意事項

1．試劑盒從冷(leng)藏環境中取出應在室溫平衡(heng)15-30 分鐘后方可使用，酶標包被板(ban)開封后如未(wei)

用完，板條應裝入密封袋中保存。

2．濃洗滌液可能會有結(jie)晶析出，稀(xi)釋時(shi)可在水浴(yu)中加溫助溶，洗滌時(shi)不(bu)影響結(jie)果(guo)。

3．各步加樣(yang)均(jun)應(ying)使用加樣(yang)器，并經常校(xiao)對其(qi)準確性，以避免試驗誤差。一次(ci)加樣(yang)時間

控制在5 分鐘內(nei)，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4．請(qing)每次測定(ding)的同時(shi)做標準曲線，做復孔。如標本中待(dai)測物質(zhi)含量過(guo)高（樣本OD 值(zhi)

大于標(biao)準品(pin)(pin)孔di一孔的OD 值(zhi)），請(qing)先用樣(yang)品(pin)(pin)稀釋液稀釋一定倍(bei)數(shu)（n 倍(bei)）后再測定，計

算(suan)時請后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5．封板膜只限一(yi)次性使用，以(yi)避(bi)免交叉污染。

6．底物請避光(guang)保存。

7．嚴格(ge)按照說明書的(de)操作進行(xing)，試(shi)驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8．所有樣品，洗滌液和各種(zhong)廢棄物都應按(an)傳(chuan)染物處理。

9．本試(shi)劑不同批(pi)號組分不得(de)混用(yong)。

七．特(te)別(bie)提醒

1.標本(ben)采集后盡早進行提(ti)取，提(ti)取按相關文(wen)獻進行，提(ti)取后應盡快(kuai)進行實(shi)驗。若(ruo)不(bu)能

馬上進行試驗，可將標本放(fang)于(yu)-20℃保存，但應避免反復凍融

2.不能檢測含(han)NaN3 的樣品(pin)，因(yin)NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性(xing)。

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