人11去氫血栓烷B2（11-DH-TXB2）ELISA試劑盒專業代測

人11去氫血(xue)栓烷(wan)B2（11-DH-TXB2）ELISA試(shi)劑盒實驗原(yuan)理

人(ren)11去(qu)氫血栓烷B2（11-DH-TXB2）試(shi)劑盒采(cai)用雙抗體(ti)一步(bu)夾心法酶聯免疫吸(xi)附試(shi)驗（ELISA）。往預先(xian)包被人11去氫血(xue)栓(shuan)烷B2（11-DH-TXB2）捕獲抗(kang)體(ti)的(de)包被微孔中，依次(ci)加入標本(ben)、標準品(pin)、HRP標記(ji)的(de)檢測抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫育并*洗滌(di)。用底物TMB顯色(se)，TMB在過(guo)氧化(hua)(hua)物酶的(de)催化(hua)(hua)下(xia)轉化(hua)(hua)成藍色(se)，并在酸的(de)作用下(xia)轉化(hua)(hua)成終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深(shen)淺和樣品(pin)中的(de)人(ren)11去(qu)氫(qing)血栓烷B2（11-DH-TXB2）呈正相關(guan)。用酶標(biao)儀在450nm 波(bo)長下測定(ding)吸光度(du)（OD 值），計算(suan)樣品濃度(du)。

樣本處理及要求

1.  血清(qing)：將收集(ji)于血(xue)(xue)清分離(li)管的全血(xue)(xue)標本在室溫放(fang)置2小(xiao)時或4℃過夜，然(ran)后1000×g離心20 分鐘(zhong)，取上清即可，或將上清置(zhi)于-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應避免反(fan)復(fu)凍融。
2.  血(xue)漿：用EDTA或肝素作(zuo)為抗凝(ning)劑采集(ji)(ji)標本，并將標本在采集(ji)(ji)后的30分鐘內于(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘，取(qu)上清即可檢測，或將(jiang)上清置于-20℃或-80℃保存，但應避免(mian)反復凍融。
3.  組(zu)織勻(yun)漿：用預冷的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織(zhi)(zhi)，去除殘(can)留(liu)血液（勻漿(jiang)中裂(lie)(lie)解(jie)(jie)的(de)紅(hong)細胞會影(ying)響測量(liang)結(jie)果），稱重后(hou)將(jiang)組(zu)織(zhi)(zhi)剪碎(sui)。將(jiang)剪碎(sui)的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)與對(dui)(dui)應體(ti)(ti)積的(de)PBS（一(yi)般按1:9的(de)重量(liang)體(ti)(ti)積比(bi)，比(bi)如1g的(de)組(zu)織(zhi)(zhi)樣品對(dui)(dui)應9mL的(de)PBS，具體(ti)(ti)體(ti)(ti)積可(ke)根(gen)據實驗需要適當調整，并做好記錄。推薦在(zai)PBS中加入蛋白酶抑制(zhi)劑）加入玻(bo)璃勻漿(jiang)器(qi)中，于冰上充(chong)分(fen)研(yan)磨。為了(le)進一(yi)步裂(lie)(lie)解(jie)(jie)組(zu)織(zhi)(zhi)細胞，可(ke)以對(dui)(dui)勻漿(jiang)液進行超聲破碎(sui)，或(huo)反復凍融。后(hou)將(jiang)勻漿(jiang)液于5000×g離心5~10分(fen)鐘(zhong)，取上清檢測。

4.  細胞(bao)培養物上清或其它生物標本：請1000×g離心(xin)20分鐘，取上(shang)清即可檢(jian)測，或(huo)將上(shang)清置于-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但(dan)應避免反復凍融。

注：標本溶血(xue)會影(ying)響后檢(jian)測結果，因此溶血(xue)標本不宜進行此項檢(jian)測。

需要而未(wei)提(ti)供的試(shi)劑盒器材

1.酶標儀（450nm）

2.高精度加(jia)樣(yang)器及槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3.37℃恒溫箱(xiang)

4.蒸餾水(shui)(shui)或去離(li)子水(shui)(shui)

人(ren)11去氫血栓烷B2（11-DH-TXB2）ELISA試劑盒組成

備注：

1.  標準品(pin)濃(nong)度依次(ci)為：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL

2.  經過大量(liang)正常標(biao)本檢(jian)驗(yan)，標(biao)本的(de)正常濃(nong)度值均(jun)在(zai)試劑盒(he)提供的(de)檢(jian)測范圍內，實(shi)驗(yan)過程中直接(jie)取(qu)50μL樣本上樣即可。當有部分樣本值超過大(da)標準(zhun)品濃度(du)時，可用樣本稀釋液將標本進(jin)行適當稀釋后(hou)再進(jin)行實驗。

注意事項(xiang)

1、嚴格按照規定的時間和溫度進行溫育以保(bao)證(zheng)準確(que)結(jie)果。所(suo)有試(shi)劑都必須在(zai)使用前(qian)達到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保(bao)存試(shi)劑。

2、洗板不(bu)正確可以(yi)導(dao)致(zhi)不(bu)準確的(de)結果(guo)。在(zai)加入底(di)物前(qian)確保盡量吸干(gan)孔內液體(ti)。溫育過程中(zhong)不(bu)要讓微孔干(gan)燥掉。

3、消(xiao)除板(ban)底殘留的液體和手指印(yin)，否則影響OD值。

4、底(di)(di)物(wu)顯(xian)色液應呈無色或很淺的顏色，已經變藍(lan)的底(di)(di)物(wu)液不能使用。

5、避(bi)免試劑和標本的交(jiao)叉污染以免造(zao)成錯誤結果(guo)。

6、在儲存(cun)和溫育時(shi)避(bi)免強光直接(jie)照射(she)。

7、平(ping)衡至(zhi)室溫后(hou)再打開密(mi)封袋以防水滴凝聚在冷板條上(shang)。

8、任何(he)反應試劑不能接觸漂(piao)(piao)白溶劑或漂(piao)(piao)白溶劑所散發的(de)強烈氣體(ti)。任何(he)漂(piao)(piao)白成分都會破壞試劑盒(he)中反應試劑的(de)生物活性(xing)。

9、不能使用過期產(chan)品(pin)。

10、如果可能傳播疾病，所有的(de)樣品都應管理好，按照規定的(de)程序(xu)處理樣品和檢測裝置。

試(shi)劑準(zhun)備

試劑(ji)盒(he)從冷藏環境中取出應(ying)在(zai)室溫(wen)平衡(heng)后方可(ke)使(shi)用。

20×洗滌緩沖(chong)液的稀釋：蒸(zheng)(zheng)餾水(shui)按1：20稀釋，即1份20×洗滌緩沖(chong)液加19份蒸(zheng)(zheng)餾水(shui)。

操(cao)作步驟

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋(dai)中(zhong)取出所需板條(tiao)，剩余(yu)板條(tiao)用自封(feng)袋(dai)密封(feng)放回4℃。

2. 設置(zhi)標(biao)(biao)(biao)準品孔(kong)(kong)和(he)樣本孔(kong)(kong)，標(biao)(biao)(biao)準品孔(kong)(kong)各加(jia)不同濃度(du)的標(biao)(biao)(biao)準品50μL；

3.樣本孔中加入待測(ce)樣本50μL；空白孔不(bu)加。

4. 除空白孔(kong)(kong)外，標準品孔(kong)(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)(kong)加(jia)入辣根過氧化物酶(mei)（HRP）標記(ji)的檢測抗體(ti)100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應孔(kong)(kong)，37℃水浴鍋或恒(heng)溫箱溫育60min。

5. 棄(qi)去液體(ti)，吸(xi)水紙上拍干(gan)，每孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液(ye)，吸(xi)水紙(zhi)上拍干(gan)，如此重復(fu)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育15min。

7.每孔加(jia)入終止(zhi)液50μL，15min內(nei)，在450nm波長處測定(ding)各(ge)孔的OD值(zhi)。

實驗結果計算

以(yi)所測標準(zhun)品的OD值(zhi)為橫坐標，標(biao)準品的濃(nong)度(du)值為縱坐標，在坐標紙上或用相關軟件繪制標準(zhun)曲(qu)線，并得到直線回歸方程，將樣品(pin)的OD值代入方(fang)程，計算出樣品(pin)的(de)濃度。

試劑盒性能

1、檢測范圍：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。

2、靈敏(min)度(du)：低檢(jian)測濃度(du)小于0.1 pg/mL。

3、特異性(xing)：不(bu)與其(qi)它(ta)可溶(rong)性(xing)結構類似物交叉反(fan)應(ying)。

4、重(zhong)復(fu)性：板內(nei)變異(yi)系數小于10% ，板(ban)間(jian)變異系(xi)數小于(yu)15% 。